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『PCR实验污染』的解决办法!

发布时间:2018-06-16 02:09:11 阅读: 来源:科盛设备
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『PCR实验污染』的解决办法!   PCR污染是每个实验室都多多少少会遇到的问题。缘由在于,PCR是非常灵敏的1项检测,100个拷贝以内的靶序列就足以产生阳性扩增,从而容易出现DNA污染致使的假阳性。那么,万能电子拉伸检测仪
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,即包括PCR的全部组分,而不加模板DNA,这对检测试剂中PCR产物残留污染是非常有益的。剪切万能检测仪
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这特别在PCR产物

  PCR污染是每个实验室都多多少少会遇到的问题。缘由在于,PCR是非常灵敏的1项检测,100个拷贝以内的靶序列就足以产生阳性扩增,从而容易出现DNA污染致使的假阳性。那末家家顺地产发工作服吗
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  图 PCR污染之1瞥

  首先,要辨别PCR污染的来源。设立阴阳性对比,有益于检测反应体系各成分的污染情况。特别是设立空白对比,即包括PCR的全部组分,而不加模板DNA,这对检测试剂中PCR产物残留污染是非常有益的。

  在排除试剂污染的可能性外,更换试剂后,若不久又发现试剂被污染了,则推敲可能为环境污染。环境污染的最主要缘由是DNA溶液的溅出和DNA气溶胶酿成的实验区域的污染,这特别在PCR产物扩增区容易出现。移液器枪头和EP管架是也较常见的污染部位。

  如果是环境污染,还可对每个区域进行涂抹采样和核酸提取,以终究鉴定污染的区域所在。德国Minerva Biolabs公司专门生产有DNA污染监测试剂盒(货号181-0010和182-0010),比较方便使用休闲工作服套装

  对PCR的环境污染,有以下几种治理方法:

  1. 用常规消毒液定期在环境中喷雾消毒处理。

  2. 稀酸处理法:对可疑用具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤;其缺点是盐酸对皮肤有1定的腐蚀性。

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. 紫外照耀法:紫外波长1般选择254/300nm,照耀30分钟至2小时。fpc曲折实验机
但需要注意的是,UV照耀仅对500bp以上长片断有效,对短片断效果不大。

  4. 选用商品化的DNA污染祛除剂学生会工作服图片
。我们推荐的是Minerva公司的PCR CleanTM 喷雾剂、湿巾。其1分钟即起效,方便快捷,效果显著,可同时去除DNA和RNA。作用1分钟后,用纸巾擦拭,摹拟环境检测台
便可完成对DNA污染的清除。

  对PCR反应液的污染,可采取以下方法:

  1. DNase I 法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。

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. 内切酶法:选择辨认4个碱基的内切酶(如MspI和TaqI等),可同时选择几种,以克服用1种酶只能辨认特定序列的缺点,室温作用1h后加热灭活进行PCR。

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. 紫外照耀法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照耀,注意事项与方法同上述UV照耀法。

  4. 尿嘧啶糖苷酶(UNG)法:用dUTP代替dTTP,气瓶水压爆破检测台
使PCR产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前,用UNG处理PCR混合液便可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性1步便可被灭活,因此不会影响含dU的新的PCR产物。

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  图 UNG法预防污染

  总之,灵敏度越高的PCR反应越容易出现PCR污染。采取适当的措施消除污染,可以免重复实验和浪费试剂,也使得实验结果更加可靠而精准。

  参考资料

  唐艳荣,张海云,等。微电脑纸箱抗压检测仪
聚合酶链式反应(PCR)中主要污染源及处理方法的分析。农业开发与设备,2017(3):99⑴00

  周荣荣,李超。日照市疾病预防控制中心PCR实验室污染情况调查。 医学检验与临床, 2017,28(5):61⑹3

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